關于發酵罐清洗的相關事項
編輯：和昌機械 2021-01-28 11:20:46 點擊：139
01、發酵罐是否需要清洗驗證？
經驗因素：
以微生物為生產菌株，或用于生產菌體，或用于生產初級或次級產物，或進行生物轉化，大規模的現代化發酵在中國也幾十年了，沒有得出發酵罐清洗會對終產品有風險的結論，所以目前微生物發酵罐的清洗沒有統一驗證規范，各個企業對策也不同：有些企業嚴格參照制藥設備的標準進行驗證，而有些企業則不做。
客觀因素
另外還有其他理由：
1、在敞開環境用自來水配制和洗罐，與在潔凈室用純化水，注射用水的制藥設備等級不同，按照制藥設備的等級進行驗證，成本也不允許。
2、發酵原料復雜，有機氮源多來自農產品，而農產品已經受到了農藥、工業廢物、及抗生素的污染，這些因素帶來的風險比罐清洗殘留污染大得多，大的風險不顧，而來抓小風險，與事無補。
3、發酵結果的波動，受到多方面的影響，從來沒有聽聞將罐的清洗殘留作為一項原因。
4、發酵培養基需要高溫滅菌，所以不涉及清洗好的罐又被環境微生物污染的風險。
是不是要驗證？
基于以上原因，討論也不會有結果。實際上，企業應該根據自己產品的特點和利益相關方的要求決定本企業是否應該進行清洗驗證。
02、清洗驗證的目的和定義
發酵罐清洗目的：
對發酵罐內部進行的清洗，一方面通過處理死角減少染菌風險，另一方面防止較多殘留物進入培養基或在設備上結垢形成滅菌死角。
清洗驗證的概念：
證明按照已批準的清洗程序對發酵罐進行清洗，并使清洗后的發酵罐不對其后的產品質量有明顯影響的有記錄支持的過程。
要求可見的和不可見的殘留物，包括前一產品的殘留物或洗滌劑的殘留物，達到規定的清潔限度要求，不會對即將生產的產品造成交叉污染。
03、對發酵罐清洗驗證的誤區
轉產驗證：
發酵罐的清洗有不同的目的，因此可分成不同的等級，比如染菌后的清洗，轉產的清洗就比正常清洗程序復雜，要求嚴格。
嚴謹的驗證需要根據不同的等級設置驗證方案，一般不能用其中一個等級的驗證替代其他等級，除非正常清洗也不分等級、不計成本的執行最嚴格的清洗方案。
如果某車間要從頭孢菌素轉產慶大霉素，在第一罐慶大霉素發酵之前按照堿煮罐1小時，再用純化水清洗2次的程序對發酵罐進行清洗，然后
1、經過取樣洗罐水檢測，頭孢菌素殘量能夠達到0.03ug/ml；
2、罐壁擦拭殘留量低于10ppm。
符合要求，驗證結束。在網上可以搜到這篇文章，里面有殘留計算方法，建議讀讀。
這一驗證針對轉產驗證，但是將它當成發酵罐的清洗驗證就以偏概全了，因為正常發酵罐的清洗程序并沒有得到驗證。
01、發酵罐是否需要清洗驗證？
經驗因素：
以微生物為生產菌株，或用于生產菌體，或用于生產初級或次級產物，或進行生物轉化，大規模的現代化發酵在中國也幾十年了，沒有得出發酵罐清洗會對終產品有風險的結論，所以目前微生物發酵罐的清洗沒有統一驗證規范，各個企業對策也不同：有些企業嚴格參照制藥設備的標準進行驗證，而有些企業則不做。
客觀因素
另外還有其他理由：
1、在敞開環境用自來水配制和洗罐，與在潔凈室用純化水，注射用水的制藥設備等級不同，按照制藥設備的等級進行驗證，成本也不允許。
2、發酵原料復雜，有機氮源多來自農產品，而農產品已經受到了工業廢物、及抗生素等的污染，這些因素帶來的風險比罐清洗殘留污染大得多，大的風險不顧，而來抓小風險，與事無補。
3、發酵結果的波動，受到多方面的影響，從來沒有聽聞將罐的清洗殘留作為一項原因。
4、發酵培養基需要高溫滅菌，所以不涉及清洗好的罐又被環境微生物污染的風險。
是不是要驗證？
基于以上原因，討論也不會有結果。實際上，企業應該根據自己產品的特點和利益相關方的要求決定本企業是否應該進行清洗驗證。
02、清洗驗證的目的和定義
發酵罐清洗目的：
對發酵罐內部進行的清洗，一方面通過處理死角減少染菌風險，另一方面防止較多殘留物進入培養基或在設備上結垢形成滅菌死角。
清洗驗證的概念：
證明按照已批準的清洗程序對發酵罐進行清洗，并使清洗后的發酵罐不對其后的產品質量有明顯影響的有記錄支持的過程。
要求可見的和不可見的殘留物，包括前一產品的殘留物或洗滌劑的殘留物，達到規定的清潔限度要求，不會對即將生產的產品造成的交叉污染。
03、對發酵罐清洗驗證的誤區
轉產驗證：
發酵罐的清洗有不同的目的，因此可分成不同的等級，比如染菌后的清洗，轉產的清洗就比正常清洗程序復雜，要求嚴格。
嚴謹的驗證需要根據不同的等級設置驗證方案，一般不能用其中一個等級的驗證替代其他等級，除非正常清洗也不分等級、不計成本的執行嚴格的清洗方案。
如果某車間要從頭孢菌素轉產慶大霉素，在首先1罐慶大霉素發酵之前按照堿煮罐1小時，再用純化水清洗2次的程序對發酵罐進行清洗，然后
1、經過取樣洗罐水檢測，頭孢菌素殘量能夠達到0.03ug/ml；
2、罐壁擦拭殘留量低于10ppm。
符合要求，驗證結束。在網上可以搜到這篇文章，里面有殘留計算方法，建議讀讀。
這一驗證針對轉產驗證，但是將它當成發酵罐的清洗驗證就以偏概全了，因為正常發酵罐的清洗程序并沒有得到驗證。
染菌后的處理程序
染菌罐的處理，其清洗可能僅是結束環節，更重要的工作內容是查死角及漏點等，而清洗措施也多用堿水煮罐。但是如果以堿水煮罐作為染菌清洗程序進行驗證，不符合要求，因為如果前面的死角處理不好，煮多久也解決不了污染的問題。
核黃素作為驗證指標存在理解上的偏差：
對核黃素作為清洗驗證的指標存在一定的爭議，主要是因為：
1、核黃素用紫外燈檢測，用肉眼觀察，不能定量。
2、核黃素噴灑濃度沒有標準。
3、已經在FAT時驗證過，所以沒必要再作為清洗驗證的潔凈指標了。
以上有些道理，但只能得出核黃素不是一個優選指標的結論。
對于手工清洗理解偏差：
目前發酵罐的清洗無外三種方式，CIP，CIP+手工，純手工。
手工洗罐不穩定，是因為知道要評價時，操作工會改變操作習慣，使驗證結果不符合實際，所以認為沒有必要對手工清洗進行驗證。
但是，這不是手工清洗不能夠驗證的理由，而且并不一定要通知操作者他洗的罐是要驗證的，驗證也不一定只進行一次，另外還可以通過人員培訓和管理措施提高手工清洗的一致性。
04、正常發酵罐的清洗驗證
清洗驗證后還會存在風險，因此首先一次驗證之后，還需要定期進行回顧性驗證或過程檢查，根據實際情況對SOP進行修訂。
以下將我們進行正常發酵罐清洗驗證的要點分享出來，未來還會分享更詳細的方案，敬請關注。
驗證前準備
在驗證方案起草前需要評估根據產品特點進行風險評估或在起草過程中對相應的文件進行確認。評估風險和文件確定的關鍵事項如下：
1、評估發酵罐清洗后，需要達到何種效果才能滿足生產需要。
2、評估清洗程序是否穩定可重現，評估驗證所需要的硬件，確定已經具備。
3、對清洗方法的試驗數據進行評估，確定結論正確。
4、評估清洗效果的可接受標準。
5、評估取樣方法是否具有可操作性：一般取樣有表面擦拭取樣及罐底取樣兩種。
6、評估檢測方法能否達到所需精度，且在化驗過程中不存在檢測指標降解。
發酵罐清洗驗證實施
1、清洗全覆蓋，無清洗死角。
將核黃素噴灑到設備內表面，先讓一組人員按照清洗程序對發酵罐進行清洗，再讓另外一組人員用紫外燈進行觀察，特別留意清洗可能的死角。
如果存在死角，要確認是SOP規定的清洗方法的問題，還是清洗方法執行的問題。如果是清洗方法的問題，結束驗證，重新修訂SOP，如果是清洗人員沒有按照SOP操作，要重新操作后，再進行驗證。
2、罐壁殘留檢驗
對于一個新罐還不曾發酵，很難找一種方法來作為衡量殘留的指標。企業可根據實際的檢測能力確定一種能夠準確檢測的物質，然后在發酵罐內表面不同位置噴灑上，清洗后，再用擦試取樣的方法對殘留進行檢測，以殘留量為千分之一等指標為限度。
3、清洗劑殘留
清洗劑殘留，對結束的一次洗罐水放出來的不同時刻，多次取樣，逐一檢測，要求每次檢測結果要符合要求。如果清洗劑是水,則這步可省略。
本文背景：
因為相信發酵罐清洗對終產品質量不會帶來風險，目前微生物發酵過程多數設施清洗驗證沒有統一規范，各個企業對這些設施的清洗驗證對策也不同：有些企業嚴格參照制藥設備的標準進行驗證，而有些企業不做驗證。
本文針對微生物發酵罐的清洗驗證目的，認知誤區和驗證方法的經驗進行分享，希望對準備做發酵罐清洗驗證，以及發酵過程相關設施驗證的朋友有所幫助。
本文論述多基于經驗，過程中雖也請教了同學和朋友，相信還會有不嚴謹的地方，所以真誠的期待同行的指正，并將經驗分享到留言區，謝謝。
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